350字英文翻译

使用酿酒酵母基因组通过PCR获得SBP1和STM1的编码序列。PCR产物分别在59和39的末端具有NdeI和XhoI的尖锐位点。片段被限制成pET- 15b，并作为His6-添加到Sbp1p和Stm1p上。标签的表达产生了pET-SBP1和pET-STM1质粒。HMT1可在实验室获得(Chern等人，2002年)。将其插入到pBS-MP中(Hwang等1999)。E.***高蛋氨酸氨肽酶((MAP))基因((pBS-MAPp-hmt1)没有改变。从PBS-MAPP-HMT1扩增STM1基因的启动子序列，并将终止密码子为11核苷酸39的pGEX-STM1质粒插入NotI。STM1在一辆双轮马车里，两匹马排成一排。和HMT1基因是在那时，利用分别具有NdeI和BamHI的位点59和39的初始知识，将PCR产物以STM1作为起始密码子连接在59的末端，并成为pET-15b载体，以产生pET-STM 1-((MAPP-HMT 1))。编码His6标签pET-15b的载体序列位于NcoI和NdeI位点之间。因此，STM1被表达为由T7启动子控制的N-末端His6- tag融合蛋白。最后，在PET-STM1-(MAPP-HMT 1)WAS上，用SBP1而不是Sbp1p/hmt1产生STM 1((PET-SBP1-[MAPP HMT 65438]精氨酸残基在所有表达质粒的凝血酶切割位点上如上所述(PET-SBP 1，PET-STM 65438凝血酶切割位点并产生STM 1 R236k、R237k、R240K和R243K突变体的位置-通过位置定向快速改变的定向突变形成根据制造商的说明，形成突变元件((Stratagene). e . * * * Tongli bl 21((DE3)细胞用作蛋白质表达的宿主。直到培养物在600 nm处达到0.6的光吸收率，用质粒转化的细胞在30℃下在Lauia的肉汤中生长。然后加入异丙基B-D-1-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG，1 mM终浓度)，细胞在收获前培养4小时。细胞裂解后，根据制造商的说明，用Ni2螯合珠(Novagen)亲和纯化重组蛋白。